上一周小编与大家一起分享了多肽的固相合成，固相合成得到的是粗品多肽，目前，在多肽合成中按照合成难易粗品纯度一般在70-80%，较难合成的一般在40-60%，如何实现多肽粗品纯度优化到高纯度，那就需要通过多肽的纯化工艺来实现。只有纯度越高的多肽产品才能实现完美的护肤或医用功效，因此，纯化的方法和工艺显得尤为重要。

对于企业而言，建立高标准的企业标准成为多肽生产质量控制的重要手段。火星电竞在质量控制方面按照制药标准进行管控并成立了专研小组，专注于多肽的纯化分析检测优化等相关工作，为多肽质量保驾护航，助力提升客户价值最大化。

关于多肽的纯化方法，包括有毛细管电泳、离子交换色谱、质谱及其联用技术等多种纯化技术，但在纯化效果、制备效率等方面都存在一定的局限性。随着色谱法分离纯化技术的发展，反相高效液相色谱（RP-HPLC）以分离效果好、分辨率高、回收率高等特点，在多肽的分离纯化制备中备受青睐，也是RP-HPLC目前液相色谱分离中使用最为广泛的一种模式。

反相高效液相色谱法分离粗肽的色谱图 

根据多肽产品在固定相和流动相的分配系数，保留时间差异来分离提纯产品。以流动相为极性，固定相为非极性的液相色谱称为反相色谱。特别适用于分子量低于5000以下的小分子肽的分离纯化。同时需要确定不同结构的多肽在柱上的保留情况（Wilce等人利用线性回归方法对2106种多肽的保留性质与结构进行分析并总结）。

分辨率和回收率高，重复性好；

分离能力强，柱效高；

溶解能力大，操作简便。

RP-HPLC是根据流动相中被分离物质分子疏水性的不同而发生强弱不同的相互作用，从而使不同分子在反相柱中彼此分离。

在多肽的RP-HPLC中，初始洗脱条件下洗脱液中有机成分浓度较低，分子与固定相疏水作用较强，几乎完全被固定相吸附。而一旦洗脱液中有机成分达到特定浓度，使得多肽与固定相间作用小于流动相与固定相间的作用时，分子完全从固定相上洗脱下来，几乎不再与固定相发生作用。这一保留机制也被人称为“on-off”机制。正是由于多肽这种特殊的保留机制，洗脱液成分极微小的改变就会大大影响多肽和蛋白质的保留行为，从而保证疏水特征相近的多肽得以充分分离。

RP-HPLC流动相常用含有0.1% 三氟乙酸（TFA）的水-乙腈（ACN）溶液体系。在分离纯化制备多肽过程中，可以通过调节流动相和固定相的组成来提高分离效率，比如，改变样品的离子对性质、固定相分布的功能基团、温度、色谱柱粒径及长度、流速等。 以上种种因素，使得RP-HPLC已成为一种被广泛使用的分离模式，普遍用于多肽的分离纯化中。

通过反相液相色谱吸附洗脱模型更为直观了解RP-HPLC的分离纯化原理。

①流动相中的多肽进入色谱柱；

②多肽吸附到反相表面；

③有机调节剂浓度达到临界值时多肽从反相色谱柱上脱附下来。

在多肽制备过程中，纯化是一项复杂繁琐的工作，每一步都要经过精细的操作，以得到高纯度的多肽药物原料。那么，多肽纯化的具体工艺流程是怎样的呢？用一张图来直观的告诉你~

由于合成过程中的一些可能的杂质肽理化性质和结构与目标多肽十分的相似，分离纯化比较困难，这对纯化技术的要求就非常高，看似简单的95%和98%两个纯度，所费的工艺和成本相差甚远，为了提高多肽纯度，有必要和必需时还要进行二次纯化，这也是为什么多肽价格昂贵的原因。

浙江火星电竞生物有限公司是一家致力于多肽产业化的国家高新技术企业，拥有全球领先的全固相合成多肽生产与开发工艺，专注于高技术壁垒的多肽原料药研发及生产；拥有以多肽首席科学家Jim Xie博士和章博士为核心的超强研发技术团队，已成功研制了包括像亮丙瑞林、利拉鲁肽、索马鲁肽等多个多肽原料，攻克了在合成端的技术壁垒和价格壁垒。凭借在多肽领域的研发优势、过硬产品质量，获得国内、国际市场较高认可。同时，火星电竞一直坚持匠心筑梦，品质为先，力争打造中国多肽领导品牌，持续为客户提供更优质的产品和更专业的服务。

多肽产品的纯化不仅靠技术，更靠技术工作人员的经验的积累，根据多肽分析的图谱的累积，建立多肽分离纯化方法数据库。这不是一朝一夕能做到能模仿的。火星电竞在多肽合成领域经验丰富，技术平台完备，拥有自己的方法数据库，能更快的响应客户的需求，为您生产出最优质的多肽产品。